實驗原理：

借助提取的DNA或cDNA作為模板，在實驗室中設(shè)計基因片段特異性質(zhì)粒并提取目的基因片段的過程稱為基因克隆。

實驗試劑：

質(zhì)粒、DNA 模板、高保真酶 ()

實驗步驟：

1. 設(shè)計工作

軟件打開待克隆基因片段，在目標(biāo)片段兩側(cè)設(shè)計正向質(zhì)粒F和反向質(zhì)粒R，將設(shè)計好的質(zhì)粒送至公司合成。

2. 實驗前試劑準(zhǔn)備

從-20℃冰箱中取出質(zhì)粒和DNA模板，渦旋混勻，離心備用。

3. 添加樣品

按照試劑說明書，分別將DNA模板、引物、高保真酶、去離子水加入EP管中。 渦旋混合并離心。

4.上機(jī)

將離心后的PCR管放入PCR儀中，設(shè)置反應(yīng)程序進(jìn)行PCR反應(yīng)。

5.檢查

PCR反應(yīng)完成后，將整個反應(yīng)液進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，并在成像系統(tǒng)中成像，初步檢測相應(yīng)基因片段是否提取成功。 結(jié)果大小符合預(yù)期dnastar引物設(shè)計，可以進(jìn)行下一步凝膠回收實驗。

防范措施：

1. DNA實驗操作，EP管、移液器吸頭等耗材需經(jīng)高壓蒸汽滅菌dnastar引物設(shè)計，去除DNase（無酶滅菌耗材除外）。

2、加樣時應(yīng)冰上操作，以保護(hù)酶，避免體溫下降，使酶更早活化。

3、由于實驗過程中存在致畸試劑，實驗操作人員嚴(yán)格穿戴實驗服和手套，確保自身安全。

如有侵權(quán)請聯(lián)系刪除！